Glikokonjugátumok a gazda helmint kölcsönhatásában, A biokémia és molekuláris biológia alapjai | Digitális Tankönyvtár
Rekombináns fehérjék előállítása A rekombináns DNS technológia egyik legfontosabb vívmánya, hogy a kutatások tárgyát képező fehérjéket nagy mennyiségben, viszonylag egyszerűen lehet előállítani géntechnológiai úton.
A vektorokat bemutató alfejezetben volt róla szó, hogy ehhez expressziós vektorokat kell használni, amely segítségével az inszertek kódolta szekvencia kifejezhető. Az expressziós vektoron olyan DNS elemeknek kell lenniük, amelyeket felismer a gazdasejt transzkripciós és fehérjeszintetizáló apparátusa.
- Parazitatabletták kezelése és megelőzése
- О, спасибо.
- A biokémia és molekuláris biológia alapjai | Digitális Tankönyvtár
- Возможно, - ответил Ричард, - но я нутром чувствую, что это маловероятно.
Bakteriális gazdasejt esetén ezek a transzkripcióhoz szükséges bakteriális promóter és transzkripciós terminátor szakasz, iiletve a transzlációhoz szükséges, az mRNS riboszómához való kötődését biztosító Shine-Dalgarno-szekvencia RBS: ribosome binding site. A genetikai kód univerzális volta miatt intron-mentes eukarióta cDNS-ek is expresszálhatók baktériumban. A rekombináns DNS-ről keletkezett fehérjét akkor is, ha a szekvenciája megegyezik az eredeti a természetes forrásból kivont fehérje szekvenciájával rekombináns fehérjének nevezzük.
A gazdasejt nem csak baktérium lehet, hanem eukarióta élesztő pl. Ezek a gazdasejtek is képesek heterológ expresszióra, vagyis arra, hogy nem a saját, hanem más fajból származó fehérjéket termeljenek.
Mindegyik rendszernek vannak előnyei és hátrányai, valamint megvannak a saját expressziós vektorai. Hozzátesszük még, hogy léteznek in vitro expressziós rendszerek is, ahol sejtmentes rendszerben, de sejtkivonatokból származó riboszómák segítségével lehet rekombináns fehérjéket előállítani, bár az in vivo módszereknél kisebb mennyiségben sőt, ezek a rendszerek időben megelőzték a heterológ rendszereket, lásd a genetikai kód feltörésénél használt kóli sejtkivonatot.
Prokarióta expressziós rendszerek Egy tipikus prokarióta expressziós vektor térképét és a lényeges DNS elemeket az Korábban gyakran használták a laktóz operon promóterét is, de a legnépszerűbb vektorokban egy, a T7 bakteriofágok által használt promóter található. Azt számos különböző módon lehet biztosítani, hogy a gazdasejtben jelen legyen a T7 RNS-polimeráz génje, mégpedig indukálható formában.
A promóter mellett az expressziós vektorok további szabályozó elemeket is tartalmaznak. Az A szabályozott expresszióval, a rekombináns fehérje glikokonjugátumok a gazda helmint kölcsönhatásában akkor lehet bekapcsolni a szintetikus és nem-metabolizálódó induktor, az IPTG hozzáadásával, amikor a gazdasejtet már nagy mennyiségben felszaporodott.
Ezzel ki lehet védeni az idegen fehérje esetleges toxikus hatását. Vegyük észre, hogy a bemutatott expressziós vektor térképén a lac-represszor gén is szerepel, tehát extra mennyiségben termelődik a sejtben a represszor fehérje, s ezáltal gátolni tudja nem csak a bakteriális kromoszóma lac-operonját, hanem a több kópiában jelen levő expressziós vektor transzkripcióját is, a lac-oporátorokhoz kötődve.
Ричард, иногда ты бываешь настолько неловок. - Все прочее, - проговорила Элли, - краткости ради я могу рассказать .
A legelső, gyógyászati célra használható rekombináns humán fehérjét E. Ez a rekombináns inzulin volt lásd Korábban a cukorbetegek sertés inzulint kaptak a humán inzulin pótlására, ami egyeseknél immunreakciót váltott ki. Genetikailag módosított baktériumokkal terápiás célra használható sok másfehérjét is előállítanak, így például véralvadási faktorokat, vagy növekedési hormonokat.
The Most Disturbing Parasites Found Inside Humans! - Monsters Inside Me
Rekombináns fehérjék előállításának további lehetőségei Ahogy említettük, rekombináns fehérjét eukarióta expressziós rendszerben, sejtkultúrában, de transzgenikus élőlényekben lásd a következő alfejezet is elő lehet állítani. Mikor használnak az olcsón és egyszerűen tenyészthető baktériumsejtek helyett komplikáltabb és drágább expressziós rendszereket?
Ennek számos oka lehet. Amennyiben a cél a fehérje túltermeltetése, nem biztos, hogy egy emlős fehérje a prokarióta sejtben natív formában fog termelődni — lehet, hogy a feltekeredése nem lesz megfelelő például a baktériumból hiányzó eukarióta dajkafehérjék hiányábanvagy nem készülnek el azok a poszttranszlációs módosulások például glikozilációamelyek az eukarióta fehérje működéséhez szükségesek.
Gazdasejtnek szóba jöhetnek élesztő, rovar és emlőssejtek. A rovarsejt-specifikus bakulovírus vektorok segítségével igen hatékony fehérjetermelő rendszereket hoztak létre. Nemcsak sejteket, hanem molylepkék lárváit is lehet velük fertőzni, s a bábokból, mint fehérjegyárból lehet kinyerni a rekombináns fehérjéket.
Miben különböznek az eukarióta expressziós vektorok a prokariótákétól? Először is a klónozás glikokonjugátumok a gazda helmint kölcsönhatásában baktériumban történik, tehát olyan vektorokat használnak, amelyek tartalmaznak bakteriális replikont is.
- A Helicobacter paraziták kezelése
- A biokémia és molekuláris biológia alapjai | Digitális Tankönyvtár
- Она вынула ногу из белой пены и подняла ее к свету.
- Paraziták véget ér
Az inszert expressziójához szükséges promóternek természetesen eukarióta eredetűnek kell lennie. Túltermeltetésre kiválóan glikokonjugátumok a gazda helmint kölcsönhatásában az erős vírus promóterek leggyakrabban citomegalovírus promótert használnak. A vektorok tartalmazhatnak további szabályozó elemeket, így például enhanszer elemet is.
Egy másik kísérleti ok, amiért eukarióta rendszert választanak gazdának az, hogy a rekombináns fehérjét a saját környezetében akarják tanulmányozni.
További, már említett előny, glikokonjugátumok a gazda helmint kölcsönhatásában a fehérje esetleges poszttranszlációs módosulásai a prokariótában nem, vagy nem megfelelően mennek végbe.
A biokémia és molekuláris biológia alapjai
Amennyiben sejten belül akarják tanulmányozni egy fehérje működését, nagy segítséget nyújt, ha a vizsgált fehérjét ún. Ez az eredetileg egy, a Csendes-óceánban élő medúzából Aequoria victoria származó 27 kDa tömegű fehérje, amelynek felfedezéséért és a géntechnológiába történő bevonásáért három kutató, Osamu Shimomura, Martin Chalfie és Roger Tsien ban Nobel-díjat kapott. A GFP a feltekeredése után a levegő oxigénjének hatására olyan kovalens módosuláson megy keresztül, ami egy intramolekuláris, kizárólag a polipeptidlánc három aminosavmaradékából kialakuló fluorofórt hoz létre.
Ez kék színű fénnyel gerjesztve zöld fényt emittál. A zöld béta-hordó szerkezetű fehérje lásd A fúziós fehérje a rekombináns DNS szintjén valósul meg úgy, hogy a GFP kódoló régiója és a vizsgált fehérje kódoló régiója egy transzlációs egységet alkot.
- Parazitál minden sorozatot egymás után
A fúziós konstrukciót úgy alakítják ki, hogy az N-terminális fehérje kódoló régiójának végéről a stop kodont eltávolítják, s azonos leolvasási keretben a fúziós partner start kodonjával kapcsolják össze. Így egy közös nyitott leolvasási keret ORF: open reading frame alakul ki, amiről egy fúziós más néven kiméra fehérje keletkezik.
A biokémia és molekuláris biológia alapjai | Digitális Tankönyvtár
A két fehérje kódoló régiója közé sokszor egy flexibilis linkert kódoló szakaszt építenek be, ami lehetővé teszi, hogy a riboszómán történő szintézis után a két lánc önállóan tekeredjen fel és mindkettő funkcióképes legyen az adott gazdasejtben.
A három aminosavból autokatalízissel kialakuló fluorofórt zöld golyókkal jelöltük PDB: 1EMA Léteznek olyan vektorok is, amelyek a GFP hely-specifikus mutagenezissel előállított, különböző színű variánsait pl. DsRed: vörös kódolják fúziós címkeként. Ezek a fúziós címkék más-más hullámhosszú fénnyel gerjeszthetők, és máshol ureaplasma antibiotikum kezelése az emissziójuk.
Segítségükkel akár két különböző színnel jelölt fehérje együttes expressziója koexpressziója és a sejten belüli lokalizációja, akár kölcsönhatásuk kolokalizáció könnyen nyomon követhető. Egy ilyen kísérlet eredményét egy zöld- és egy vörös-fúziós fehérje kolokalizációja, ami a képen sárga színnel jelenik meg mutatja be a A bal oldali és a középső ábrán a két fehérjét külön-külön transzfektálták egy emlős sejtvonalba.
